Plateau « Imagerie »

Responsable : Dr.  Florence Delort (IGR UPCité, équipe 4 de BFA)

 

Le plateau se compose des éléments suivants :

    • un microscope confocal Zeiss LSM 700 (Objectifs x10, x40, x63 (huile), x100 (huile)) ;
    • un microscope inversé à fluorescence Zeiss Axio A1 Observer (Objectifs x10, x40, x63 (air)) ;
    • un microscope à fluorescence Leica-Leitz DM-RD avec caméra Hamamatsu (Objectifs x10, x40 (huile), x63(huile), x100 (huile),) ;
    • un système de microscopie quantitative Leica DM95 composé d’une caméra haute précision ;
    • un stéreomicroscope à fluorescence (Leica), sous la responsabilité d’H. Tricoire (Equipe 7 BFA).

Le plateau Imagerie ne peut être utilisé que par des personnes ayant été formées par sa responsable. De plus La charte d’utilisation du matériel s’y applique.

 

Le microscope confocal est un microscope photonique, composé :

  • de sources de lumière : différents L.A.S.E.R. : 405nm, 488nm, 555nm et 639nm.
  • d’un trajet optique qui comprend des trous d’épingles (pinholes) réglables, des miroirs pour balayer le faisceau du L.A.S.E.R sur l’échantillon, des objectifs et des oculaires.
  • de capteurs et de photomultiplicateurs.

L’avantage du microscope confocal est d’éliminer la lumière provenant de coupes optiques supérieures et inférieures au plan d’intérêt, à l’aide de trous d’épingles situés à la source de la lumière et avant le détecteur. Ainsi, seule la lumière provenant du plan focal atteint le détecteur qui peut ainsi mesurer l’intensité lumineuse de chaque point et la stocker dans un ordinateur.

Cet appareil possède une platine motorisée qui permet entre autre une acquisition en z ou en mosaïque.

 

Fonctionnement

Les échantillons à étudier sont marqués par les utilisateurs avec des fluorochromes appropriés, qui sont alors excités par un des L.A.S.E.R.. Le faisceau est balayé sur l’ensemble de l’échantillon grâce à un jeu de miroir. L’émission des fluorochromes, résultant de l’excitation, est captée par le photomultiplicateur et l’image est reconstituée point par point sur l’écran. De plus, grâce à la présence du pinhole devant le détecteur, seule la fluorescence provenant du plan focal est captée. La fluorescence hors focus est bloquée.

 

Images obtenues

Les images, reconstituées en fausses couleurs ne sont composées que de la fluorescence émise au plan focal.

 

Avantages

  • Très faible profondeur de champs (environ 400 nm). RESOLUTION AXIALE (en z): 400nm (contre 580 nm), LATERALE (en x et y): 150 (contre 230nm).
  • Images nettes (sans traitement), sans flou parasite : coupe optique. Reconstruction 3D rapide

 

N.B. Le plateau ne possède pas d’enceinte thermostatée à atmosphère contrôlée